پایان نامه دكتراي تخصصي كلينيكال پاتولوژي در این بخش قابل دانلود می باشد و شما می توانید این پایان نامه دکتری دامپزشکی را بلافاصله بعد از خرید دانلود نمایید. در ادامه می توانید فهرست مطالب پایان نامه دكتراي تخصصي كلينيكال پاتولوژي با عنوان " بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوساله‌ها و بزهاي كشتارشده به روش PCR"را مشاهده کنید. لازم به ذکر است که این پایان نامه دکتری دامپزشکی به فرمت word می باشد.
فهرست مطالب
فصل اول:کليات
1- تاريخچه
2- خصوصيات کلي مايکوپلاسما
3- مقاومت مايکوپلاسماها
4- طبقه بندي مايکوپلاسماها
5- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس
6- فيلوژني
7- ساختمان
1-7-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس
2-7- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم
8- بيولوژي مولکولي
9- توالي‌هاي تکراري
10- پروتئينهاي سطحي
11- فاکتور حدت
12- آناليز پروتئين
13- طبقه بندي سويه‌ها
14- مشخصات گونه مايکوئيدس
15- کشت و رشد گونه مايکوئيدس
16- کشت و رشد گونه کاپري کولوم
1-16- محيط Thiacourt
17- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان
1-17- علائم باليني
2-17- علائم کالبدگشايي بيماري
3-17- پاتوژنز
1-3-17- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني
4-17- اختصاصيت ميزبان
5-17- انتقال بيماري
6-17- سير همه گيري
1-6-17- مخزن
2-6-17- راه انتقال
7-17- پيشگيري و کنترل
1-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري
2-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري
3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي
18- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان
1-18- علائم باليني
2-18- علائم کالبد گشايي
19- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم
1-19- سندروم MASKePs
2-19- علائم باليني
3-19- علائم کالبد گشايي
4-19- سندروم آگالاکتيه واگير
20- گونه مايکوپلاسما کاپري
1-20- بيماريزايي
2-20- علائم کالبد گشايي
21- سير همه‌گيري
1-21-مخزن
2-21-راه انتقال
3-21-جمعيت ميزبان
22-پيشگيري وکنترل
1-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماری
2-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري
3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي
23-واکسن
1-23-واکسن MmmLC
2-23-واکسن Mccp
3-23-واکسن Mcc
24-اختصاصيت ميزبان در کلاستر مايکوئيدس
25-تشخيص افتراقي
1-25-شناسايي عامل بيماري زا
1-1-25-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي
2-25- تشخيص آزمايشگاهي
1-2-25- روش کشت و جداسازي
1-1-2-25- انتخاب نمونه ها
2-1-2-25- آماده سازي نمونه ها
3-25- تستهاي بيوشيمي
4-25- روشهاي سرولوژي
1-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي
2-4-25- تست مهاري رشد
3-4-25- تست ايمونو فلورسانس
4-4-25- تست رسوب ژلي
5-4-25- تست فيکساسيون کامپلمان
6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون
7-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتکس
8-4-25- تست اليزاي رقابتي
9-4-25- ساير تستهاي تشخيصي
5-25 - مشکلات روشهاي سنتي
6-25- تشخيص با استفاده از PCR5
فصل دوم: روش کار
26- روش کار
1-26- جمع آوري نمونه
1-1-26- مواد لازم
2-1-26- بخش جمع آوري نمونه
3-1-26- نمونه برداري
2-26- کشت و جداسازي نمونه ها
1-2-26- مواد لازم
2-2-26- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان
1-2-2-26- مواد لازم
2-2-2-26- روش تهيه محيط کشت
3-26- استخراج DNA مايکوپلاسما
1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي
4-26- فرايند PCR
1-4-26- مواد لازم
2-4-26- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR
1-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونه‌ها
2-2-4-26- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شد
3-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه
3-4-26- پرايمرها
4-26- واکنش PCR
5-26- تهيه ژل الکتروفورز
1-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد
6-26- الکتروفورز
7-26- رويت باندهاي ايجاد شده
فصل سوم: نتايج
27- نتايج
1-27- جداسازي
1-1-27- بررسي عملکرد محيط کشت
2-1-27- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي
1-2-1-27- نتايج روز پنجم
2-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم
3-2-1-27- نتايج روزپانزدهم
2-27- نتايج PCR
1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس
2-2-27- تائيد کلوني هاي جدا شده
3-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس
4-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه
5-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ
3-27- نتايج کالبد گشايي
1-3-27- معيار انتخاب
چكيده
كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس در برگيرنده مهمترين پاتوژنهاي تنفسي نشخواركنندگان است كه ساليانه، خسارات اقتصادي سنگيني بر صنعت دامپروري كشورهاي جهان وارد مي‌كند. اخيرا شيوعهاي بازپديدي از عفونتهاي پلوروپنوموني نشخواركنندگان در منطقه خاورميانه گزارش شده است. در اين شرايط تعيين وضعيت گله‌هاي كشور از نظر آلودگي به گونه‌هاي پاتوژن اين كلاستر، از اهميت خاصي برخوردار است. هنوز گزارشي از شناسايي و جداسازي گونه‌هاي درگير از عفونت پلوروپنوموني در ايران بدست نيامده است. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك در نمونه‌هاي باليني و دشواريهاي فراوان جداسازي ميكروارگانيسم، به ضرورت شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي جايگزين افزوده است.
علاوه بر اين، دستيابي به روشي كاربردي و سريع، در تشخيص عفونتهاي تنفسي گله‌ها و تخميني از وضعيت عفونت در ايران، مدنظر اين تحقيق بوده است.
در اين مطالعه، 100 نمونه ريه با ضايعات مشكوك به عفونتهاي تنفسي مايكوپلاسمايي از 100 گله مشكوك (50 گله گاو،30 گله گوسفند،20 گله بز) در اطراف كرمانشاه ، در سالهاي 1386-1384 جمع آوري شدند. ضايعات ماکروسکوپي شامل کبدي شدن ريه‌ها با زخم‌هاي خاکستري و سفيد(جامد شدن) و ظاهر منقوط با يا بدون فيبرين بودند. نمونه‌ها در محيط کشت PPLO براث و آگار کشت داده شدند. پس از پاساژهاي متعدد،از 23 گله مشکوک،تک کلوني تخم‌مرغي شکل مايکوپلاسما جداشد(11 گله گاو،8 گله گوسفند،4 گله بز).
اما در واكنش, PCR63 گله عفونت مايكوپلاسماي تنفسي نشان دادند (37 گله گاو، 17 گله گوسفند، 9 گله بز).
اين امر، مبين اين نكته است كه عليرغم اينكه جداشدن عامل مايكوپلاسمايي از نمونه‌ها در محيط كشت، اساس تعيين وضعيت عفونتهاي مايكوپلاسمايي قلمداد مي‌شود، اما سخت‌رشد بودن گونه‌هاي مورد مطالعه در محيط كشت و عدم دستيابي سريع به نتيجه، كارآيي اين روش تشخيصي را در پايش متداول عفونت گله‌ها زير سوال برده است.
علاوه بر اين، بكاربردن آنتي بيوتيكهاي متنوع در دوره درمان و از بين رفتن ميكروارگانيسم در خلال جمع آوري نمونه، نتايج رشد در محيط كشت مايكوپلاسما را دستخوش تغيير داده است.
از اين رو، استفاده از روشهاي مولكولي PCR بعنوان يك روش كاربردي، حساس و سريع توصيه مي‌شود. پس از استخراج DNA نمونه‌ها به روش فنل کلروفورم و جدا كردن نمونه‌هاي آلوده به مايكوپلاسما از طريق PCR ، با استفاده از پرايمر اختصاصي كلاستر مايكوئيدس نمونه‌هاي مايكوپلاسمايي تحت واكنش PCR قرار گرفتند.
باند bp 548، تنها در نمونه كنترل ( سويه F38) ديده شد. به منظور كنترل روند واكنش، نمونه‌ها با پرايمر اختصاصي مايكوئيدس كلوني بزرگ و پرايمر اختصاصي آگالاكتيه، به طور جداگانه PCR شدند كه نتيجه اين آزمايش، يافته‌هاي آزمايش قبلي را تائيد مي‌كرد.
اگر چه اين تحقيق نشان داد كه عامل عفونتهاي تنفسي مشكوك در نمونه‌هاي مورد مطالعه نمي‌تواند از گونه‌هاي كلاستر مايكوئيدس باشد، منتهي تخمين ميزان عفونت در گله‌هاي مورد مطالعه، احتياج به تحقيقات وسيعتر با جمع‌آوري تعداد نمونه‌هاي بيشتر در مطالعات بعدي دارد.